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原位杂交的应用范围:
细胞特---mrna转录的定位,可用于基因图谱,基因表达和基因组进化的研究;
感1染组织中---dna/rna的检测和定位,如eb---mrna、人类乳1头状瘤1---和巨细胞---dna的检测;
癌基因、抑癌基因及各种功能基因在转录水平的表达及其变化的检测;
基因在染色体上的定位;
检测染色体的变化,如染色体数量异常和染色体易位等;
分裂间期细胞遗传学的研究,如遗传病的产前诊断和某些遗传病基因携带者的确定,某些肿1瘤的诊断和生物学剂量测定等。
后固定:胃蛋白酶---后才需要。固定液为1%---/0.1 m pbsph7.2-7.6,含有1/1000 depc。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。
原位杂交的预杂交:湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体,不洗。
杂交——按每张切片20μι杂交液,加在切片上。将原位杂交专1用盖玻片的保护膜揭开后,盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
杂交后洗涤:揭掉盖玻片,37℃左右水温的2×ssc洗涤5分钟×2次;37℃0.5×ssc洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×ssc洗涤15分钟×1次(如果有非特---染色,重复0.2×ssc洗涤15分钟×1-2次)。
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