实验原理： tunel技术可对组织或细胞中凋亡小体或单个凋亡细胞进行染色，能准确反映细胞凋亡典型的生物化学和形态特征。凋亡细胞内内源性---内切酶被而将自身染色体dna切断成缺口或3-oh末端片段这一特点，利用脱氧核苷酸末端转移酶将标有标记物(如，生物素或荧光素)的脱氧核苷酸转移到3-oh末端，分子病理技术服务，再用组化法或荧光检测凋亡细胞。

fish是原位杂交技术大家族中的一员，因其所用探针被荧光物质标记间接或直接而得名，该方法在80年代末被发明，现已从实验室逐步进入---诊断领域。基本原理是荧光标记的---探针在变性后与已变性的靶---在退火温度下复性；通过荧光显微镜观察荧光信号可在不改变被分析对象即维持其原位的前提下对靶---进行分析。dna荧光标记探针是其中常用的一类---探针。利用此探针可对组织、细胞或染色体中的dna进行染色体及基因水平的分析。荧光标记探针不对环境构成污染，灵敏度能得到保障，可进行多色观察分析，因而可同时使用多个探针，缩短因单个探针分开使用导致的周期过程和技术障碍。

菌落的裂解及dna结合于纤维素滤膜

1 在一张保鲜膜上制作一个装有0.5mol/l naoh的小洼0.75ml，使菌落面朝上，将滤膜放到小洼上，展平保鲜膜，使滤膜均匀湿润，让滤膜留于原处2-3分钟。

2 用干纸巾从滤膜的下方吸干滤膜，用一张新的保鲜膜和新配制的0.5mol/l naoh重复步骤1。

3 吸干滤膜，将滤膜转移到新的带有1mol/l tris·cl(ph7.4的保鲜膜洼上。5分钟后吸干滤膜，再重复一次该步骤。

4 吸干滤膜，把它转移到有1.5mol/l nacl、0.5mol/l tris·cl (ph7.4的保鲜膜小洼上5分钟后吸干滤膜，转移到一张干的滤纸上，置于室温20-30分钟，使滤膜干燥。

5 将滤膜夹在两张干的滤纸之间，在真空烤箱中于80℃干烤2小时，固定dna。

6 将固定在膜上的dna与32 p标记的rna进行杂交。

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