水稻RNA原位杂交检测服务-科锐诺生物科技

菌落的裂解及dna结合于纤维素滤膜

1 在一张保鲜膜上制作一个装有0.5mol/l naoh的小洼0.75ml，使菌落面朝上，将滤膜放到小洼上，展平保鲜膜，使滤膜均匀湿润，让滤膜留于原处2-3分钟。

2 用干纸巾从滤膜的下方吸干滤膜，用一张新的保鲜膜和新配制的0.5mol/l naoh重复步骤1。

3 吸干滤膜，将滤膜转移到新的带有1mol/l tris·cl(ph7.4的保鲜膜洼上。5分钟后吸干滤膜，再重复一次该步骤。

4 吸干滤膜，把它转移到有1.5mol/l nacl、0.5mol/l tris·cl (ph7.4的保鲜膜小洼上5分钟后吸干滤膜，转移到一张干的滤纸上，置于室温20-30分钟，使滤膜干燥。

5 将滤膜夹在两张干的滤纸之间，在真空烤箱中于80℃干烤2小时，固定dna。

6 将固定在膜上的dna与32 p标记的rna进行杂交。